外显子捕获的操作步骤

Posted 2023-05-07

参考技术A

(1)基因组DNA经“霰弹法”切成小片段后，克隆在位于“外显子捕获序列”下游的克隆位点上。
(2)将这些重组载体汇总后感染反转录病毒的专宿包装细胞系(ecotropicretroviral packaging cell line)——ψ2细胞系。ψ2细胞提供蛋白质产物使载体(自身不能合成病毒蛋白质)成为反转录病毒在细胞里增殖。当反转录病毒在细胞内转录时，如果插入片段中包含有功能的SA位点，则有可能发生RNA剪接反应而将IVS切除。
(3)已剪接和未剪接的病毒RNA都包装在病毒子(virion)中，从细胞培养液中收集后用来感染兼宿反转录病毒包装细胞系(amphotropic retroviral packagingcell line)PA-317。这使反转录病毒再进行一轮复制，并产生能感染猴肾细胞系COS细胞的高效价病毒原种。这样做是由于上一轮克隆在病毒中的插入片段的剪接效率极低，而在第二轮复制时则大大提高了RNA剪接的机会。
(4)从第二个细胞系PA-317细胞中分离得到的病毒，用来感染组成型产生SV40T(肿瘤)抗原的COS细胞。病毒RNA基因组被反转录，并在载体上的SV40复制起点作用下，以环状DNA附加体形式进行复制。

武田呈报mobocertinib的最新结果，进一步证实EGFR外显子20插入+ mNSCLC患者的临床收益

−该结果显示，口服靶向治疗药物mobocertinib中位总生存期为24个月，多种EGFR外显子20 (Exon20)插入变体均观察到缓解

 

−该结果纳入mobocertinib的新药申请(NDA)，该申请最近进入美国食品药品管理局(FDA)优先审理

 

−将在ASCO年会上展示的数据进一步展现mobocertinib在缺乏获批靶向治疗药物的患者人群中的潜力

 

日本大阪和马萨诸塞州剑桥--(美国商业资讯)--武田药品工业株式会社(TSE:4502/NYSE:TAK)（简称“武田”）今天发布mobocertinib (TAK-788)口服治疗表皮生长因子受体(EGFR)外显子20插入突变阳性（插入+）转移性非小细胞肺癌(mNSCLC)患者1/2期临床试验的最新数据。结果显示，经一年多随访，mobocertinib继续展示有临床意义的益处，该结果将于6月4日在视频召开的美国临床肿瘤学会(ASCO)第57届年会上呈报。

 

埃默里大学温什普癌症研究所副所长Suresh S. Ramalingam, MD表示：“EGFR外显子20插入+ mNSCLC患者缺乏经过验证的靶向治疗选择。mobocertinib的1/2期研究最新结果显示，先前接受含铂化疗患者的客观缓解率、缓解持续时间和总生存期令人鼓舞。”

 

来自1/2期试验的分析纳入先前接受过含铂化疗的EGFR外显子20插入+ mNSCLC患者。所有患者均接受160毫克每日一次口服治疗。基于1月在国际肺癌研究学会(IASLC) 2020年世界肺癌大会(WCLC)上呈报的发现，该结果显示，中位总生存期(OS)为24个月，中位随访期为14个月，多种EGFR外显子20插入变体中均观察到缓解。其他关键数据点仍与先前报告的数据保持一致，包括独立审查委员会(IRC)确认的客观缓解率(ORR)为28%、中位缓解持续时间(DoR)为17.5个月、疾病控制率(DCR)为78%。

 

实测安全性属可处治，与以往发现一致。根据最新数据，先前接受含铂治疗的患者中最常见的治疗相关不良事件(TRAE; ≥ 20%)为腹泻(91%)、皮疹(45%)、甲沟炎(38%)、食欲减退(35%)、恶心(34%)、皮肤干燥(31%)和呕吐(30%)。唯一≥3度的TRAE (≥5%)为腹泻(21%)。导致> 2%的患者停药的AE为腹泻(4%)和恶心(4%)。

 

武田肿瘤治疗领域部主管Christopher Arendt博士表示：“我们很高兴能将这一有前景的总生存数据添加到证据库中，该数据显示，mobocertinib有望作为先前接受含铂治疗的EGFR外显子20插入+ mNSCLC患者的有效口服治疗选择。mobocertinib目前正在美国FDA优先审理中，我们期待与各国监管部门继续对话，推介mobocertinib作为上述患者的新治疗选择。”

 

mobocertinib先前于2020年4月通过FDA突破性治疗药物认证，并于2021年4月进入新药申请(NDA)优先审理。如果获批，mobocertinib将成为首个上市的口服治疗药物，该药物专门旨在选择性靶向作用于EGFR外显子20插入突变。

 

武田已设立扩点获药项目(EAP)，患者在监管部门审批该在研药物期间或有资格获得mobocertinib。其他信息，包括符合武田EAP资格的具体条件，请点击此处。

 

请在今年ASCO年会上了解有关武田肿瘤部布局的更多信息。武田将在美国东部时间6月8日周二下午6:30主持针对分析师和投资者的网络广播，讨论ASCO上呈报的上述及其他数据，并提供有关肿瘤产品线的最新信息。欲了解更多信息，请联系[e-mail]。演示幻灯片和此次网络广播的存档重播，请访问https://www.takeda.com/investors/reports/ir-events/。

 

关于mobocertinib (TAK-788)

 

mobocertinib是一种在研、同类首创、酪氨酸激酶抑制剂(TKI)口服治疗药物，专门设计用于选择性靶向作用于表皮生长因子受体(EGFR)外显子20插入突变。2019年，mobocertinib获得美国FDA孤儿药认证，用于治疗伴HER2突变或EGFR突变（包括外显子20插入突变）的肺癌。2020年4月，mobocertinib获得FDA突破性治疗药物认证，用于含铂化疗期间或之后疾病进展的伴EGFR外显子20插入+转移性非小细胞肺癌(mNSCLC)患者。2020年10月，mobocertinib获得中国药品审评中心(CDE)突破性治疗药物认证，用于先前已接受过至少一种全身化疗的伴EGFR外显子20突变的局部晚期或转移性NSCLC患者。

 

关于该项1/2期试验

 

该项1/2期试验评估口服mobocertinib在非小细胞肺癌(NSCLC)患者中的安全性、药代动力学和抗肿瘤活性。该试验包括1期剂量递增试验（评估mobocertinib单药治疗和与化疗联合）、若干扩群队列以及伴表皮生长因子受体(EGFR)外显子20插入+转移性NSCLC (mNSCLC)患者中的一个延伸队列。

 

先前接受含铂治疗的群体有效性分析调查该项1/2期试验中接受含铂治疗并接受mobocertinib 160毫克每日一次治疗的114例EGFR外显子20插入+ mNSCLC患者。

 

关于EGFR外显子20插入+ mNSCLC

 

非小细胞肺癌(NSCLC)是最常见的肺癌类型，据世界卫生组织数据，其占全球每年约180万例新诊断肺癌病例的约85%1,2。表皮生长因子受体(EGFR)外显子20插入+转移性NSCLC (mNSCLC)占NSCLC患者的约1-2%，亚裔人群中较西方人群中更常见3-7。该病预后比其他EGFR突变型差，因为目前FDA尚未核准靶向作用于EGFR外显子20插入的治疗药物，而现有EGFR TKI和化疗对这些患者的益处有限。

 

武田承诺继续EGFR外显子20插入+ mNSCLC领域的研发，以期为全世界每年约3万例（包括仅美国就有3,000例）获诊该病的患者提供一款靶向治疗选择3,4。

 

武田对肿瘤的承诺

 

我们的核心研发使命是通过我们对科学、突破性创新和改善患者生活的激情的承诺，向全世界癌症患者交付新型药品。无论是凭借我们的血液治疗药物、我们强大的产品管线，还是实体瘤药品，我们的宗旨是保持创新和竞争力，以便向患者提供他们需要的治疗。欲了解更多信息，请访问www.takedaoncology.com。

 

关于武田药品工业株式会社

 

武田药品工业株式会社(TSE: 4502/NYSE: TAK)是一家总部位于日本的以价值观为基础的研发驱动型跨国生物制药翘楚，秉承我们对患者、员工和地球的承诺，武田致力于发现和交付转变命运的药品。武田专注于四大治疗领域的药物研发：肿瘤、罕见遗传疾病和血液学、神经科学及胃肠病学(GI)领域，并针对血液制品及疫苗领域进行专项研发投入。我们始终专注于高度创新药物的研发，通过开拓全新治疗方案、增强合作研发引擎实力，打造一条稳健且形式多样的产品管线，助力改善人们的生活。我们的员工遍布于大约80个国家和地区，与当地医疗健康合作伙伴携手，为全球患者带来健康福音。如需了解更多信息，请访问https://www.takeda.com。

 

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医疗信息

 

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1 World Health Organization. Latest Global Cancer Data.（世界卫生组织。全球癌症数据最新版。）https://www.who.int/cancer/PRGlobocanFinal.pdf.访问于2019年5月11日。
2 American Cancer Society. What is Non-Small Cell Lung Cancer?（美国癌症学会。何为非小细胞肺癌？）https://www.cancer.org/cancer/non-small-cell-lung-cancer/about/what-is-non-small-cell-lung-cancer.html.
3 Riess, Jonathan W. Diverse EGFR Exon 20 Insertions and Co-Occurring Molecular Alterations Identified by Comprehensive Genomic Profiling of NSCLC.（通过NSCLC的全面基因组分析确定了多种EGFR外显子20插入和共同发生的分子变化。）https://www.jto.org/article/S1556-0864(18)30770-6/fulltext.访问于2020年4月7日。
4 Fang, Wenfeng. BMC Cancer. EGFR exon 20 insertion mutations and response to osimertinib in non-small-cell lung cancer.（《BMC癌症分册》非小细胞肺癌的EGFR外显子20插入突变与对osimertinib的应答）https://bmccancer.biomedcentral.com/articles/10.1186/s12885-019-5820-0.访问于2020年4月7日。
5 Kobayashi Y, Mitsudomi T. Not all epidermal growth factor receptor mutations in lung cancer are created equal: Perspectives for individualized treatment strategy. Cancer Sci. 2016;107(9):1179-1186. doi:10.1111/cas.12996（肺癌中并非所有的表皮生长因子受体突变都相同：个体化治疗策略的观点。《癌症科学》2016;107(9):1179-1186. doi:10.1111/cas.12996）
6 Yatabe Y, Kerr KM, Utomo A, et al. EGFR mutation testing practices within the Asia Pacific region: results of a multicenter diagnostic survey. J Thorac Oncol. 2015;10(3):438-445. doi:10.1097/JTO.0000000000000422（亚太地区EGFR突变检测实践：多中心诊断调研的结果。《胸科肿瘤学杂志》2015;10(3):438-445. doi:10.1097/JTO.0000000000000422）
7 Kris MG, Johnson BE, Berry LD, et al. Using multiplexed assays of oncogenic drivers in lung cancers to select targeted drugs. JAMA. 2014;311(19):1998-2006. doi:10.1001/jama.2014.3741（采用肺癌致癌驱动因素的多重分析来挑选靶向药物。《美国医学会杂志》2014;311(19):1998-2006. doi:10.1001/jama.2014.3741）