sam文件转换为bam文件——SAMtools

Posted 2023-04-30

参考技术A 在转录组数据与参考基因组进行比对后，得到sam文件，后续分析需要将sam转换为bam，这里用到的工具是SAMtools。

序列比对 —— Hisat2 - (jianshu.com)

SAMtools的主要功能是读取、写出、编辑、查看SAM/BAM/CRAM格式的数据文件。

SAMtools官方网站：
http://www.htslib.org/

链接：
http://www.htslib.org/download/

安装：

这里看到基础命令主要分为六个模块，分别为索引、编辑、文件操作、统计、视图以及其他。这里想要SAM格式转为BAM格式，主要用到的是Viewing模块中的view。

说明书：
http://www.htslib.org/workflow/fastq.html

在老版本1.9的samtools中，需要用-s 指定sam文件，1.14中不需要指定。

samtools view命令完成sam转为bam。

-@8：8个线程
-b：输出格式bam文件 >：输出文件名

pysam读取bam files

pysam - 多种格式基因组数据（sam/bam/vcf/bcf/cram/…）读写与处理模块（python）

在开发基因组相关流程或工具时，经常需要读取、处理和创建bam、vcf、bcf 文件。目前已经有一些主流的处理此类格式文件的工具，如samtools、picard、vcftools、bcftools，但此类工具集成的大多是标 准功能，在编程时如果直接调用的话往往显得不够灵活。

本文介绍的是一个处理基因组数据的python模块，它打包了htslib-1.3、samtools-1.3 和 bcftools-1.3的核心功能，能在编程时非常灵活的处理bam和bcf文件。

以下主要介绍pysam的安装和使用方法：

1. 安装

如果Linux上安装了pip，可以一键安装，在集群上的话，需要登录安装节点进行安装。

import pysam

 

2.读取bam文件(pysam.AlignmentFile)

bam是sam的二进制文件，因其占用空间少，所以都会使用bam进行存储和操作。

要读取bam文件,必须先创建一个AlignmentFile对象.

for line in samfile:
    print(line)
    break

但顺序读取还不够灵活,我们有时需要随机读取(提示:sam不能随机读取),pysam的fetch方法提供了随机读取功能.

直接使用fetch会报错

samtools index corrected.bam

fetch返回的是一个迭代器(iterator),可以迭代读取内容.

fetch(self, reference=None, start=None, end=None, region=None, tid=None, until_eof=False, multiple_iterators=False)

 

3.读取vcf/bcf文件(pysam.VariantFile)

读取方法同上,只是使用的是VariantFile方法:

bgzip -c MHC.g.vcf > MHC.g.vcf.gz

然后用bcftools建立索引

for rec in vcf_in.fetch(\'chr6\', 28577796, 28577896):
...     print(rec)
...     break

3.随机读取fasta文件（faidx建立索引）

读取方法略有不同，fetch返回的本身就是一个字符串。

fasta_file = pysam.FastaFile(path)
fasta_file.fetch("m160727_060737_42266_c101014182550000001823222610211695_s1_p0/110008/22268_22731")

 

4.创建并写入到新的bam或vcf文件

pysam的核心功能是可以随心所欲的读取数据,处理之后,写入到一个新建的bam或bcf文件里.

我们可以完全自定义一些内容,然后写入到一个新的bam文件里,如下:

") a.tags = (("NM", 1), ("RG", "L1")) outf.write(a)

同理,我们也可以读取一个已有的bam文件,逐个修改以上的属性,然后存储到一个新的bam文件里.这里不再举例.

上面设置header可能有点麻烦,容易出错,但我们可以复制一个已有bam文件的header到一个新的bam文件里.

outf = pysam.AlignmentFile(path_out, "wb", template=samfile)

以上template参数指定了模板bam文件.

 

5. 关闭文件

outf.close()

 

总结:

pysam模块非常实用,有了pysam模块,我们就可以非常灵活的操纵bam/bcf文件,而不必依赖于samtools或bcftools. pysam可以随机读取bam/bcf文件,也可以将处理后的内容自定义输出到bam/bcf文件.

 

以上只介绍了pysam最常见的功能,更多pysam功能请参照:http://pysam.readthedocs.io/en/latest/index.html