易基因:DNA甲基化研究的3大前期探索性实验思路|干货系列
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近些年以来,DNA甲基化研究一直是顶级期刊、基金资助、临床研究、药物研发上市的多重热点,其研究方向涵盖疾病发生发展、疾病标志物研究、环境因素暴露与响应、发育和分化等多维度。
研究人员为DNA甲基化课题申请作准备以及为降低DNA甲基化实验风险,通常会进行DNA甲基化研究的前期探索性实验,主要包括:
- 检测DNA甲基化酶和去甲基化酶的表达
- 检测整体DNA甲基化水平变化
- 其他前期实验
一、检测DNA甲基化酶和去甲基化酶的表达
方法包括:
- RT-qPCR检测mRNA表达
- Western blot检测蛋白质翻译
e.g. 高脂饮食组和肥胖人群中均观察到DNMT的RNA和蛋白质表达上调
二、检测整体DNA甲基化水平变化
方法包括:
- 5mC甲基化免疫荧光染色(定性)
- DNA斑点杂交(定性)
- 比色法(定量)
- 质谱法(定量)
斑点杂交(Dot blot)
免疫荧光显微观察
比色法/质谱法
三、其他前期实验
在没有条件开展甲基化相关前期实验的情况下,也可以开展其他预实验。包括:
- 关键表型指标测定
- 转录组(成本低廉)
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