PCR技术与DNA半保留复制的异同？

Posted 2023-05-17

需要的底物相同，都需要模板，但所需酶不同，PCR中需热稳定DNA聚合酶，且通过高温解开双链；半保留复制中需解旋酶，DNA聚合酶。 参考技术A 相同点：所需原料相同，都是以碱基互补配对选择增值的。 不同：PCR 是高温解旋 体内用的是 DNA 解旋酶 ，DNA 复制是以自身为模板，边解旋，边复制，边折叠的，自身 DNA 复制有一个变构问题。 PCR 是一个一个核苷酸或脱氧核苷酸用酶接上去，再洗脱再接下一个的。形成的是单链，而且没有包裹的 蛋白。 PCR 是一个体外过程，他们的酶不同，反应条件也不同，复制产物可以是双链，也可以是单链！！ PCR 是体外扩增 DNA 的过程~~ 所需温度较高,分三个阶段:高温解链,低温复性,中温合成。

PCR（聚合酶链式反应）技术的基本原理

 

PCR（聚合酶链式反应）技术的基本原理

类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性→退火→延伸三个基本反应步骤构成：

①模板DNA的变性：7a686964616fe78988e69d8331333366303738模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备。

②模板DNA与引物的退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合。

③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在72℃、DNA聚合酶（如TaqDNA聚合酶）的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基互补配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链。

重复循环变性→退火→延伸三过程就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。

扩展资料：

PCR反应条件为温度、时间和循环次数。温度与时间的设置：基于PCR原理三步骤而设置变性-退火-延伸三个温度点。在标准反应中采用三温度点法，双链DNA在90～95℃变性，再迅速冷却至40～60℃，引物退火并结合到靶序列上，然后快速升温至70～75℃。

在Taq DNA聚合酶的作用下，使引物链沿模板延伸。对于较短靶基因（长度为100～300bp时）可采用二温度点法，除变性温度外、退火与延伸温度可合二为一，一般采用94℃变性，65℃左右退火与延伸（此温度Taq DNA酶仍有较高的催化活性）。

参考资料：百度百科-聚合酶链式反应